HMGB1阻断抗体

HMGB1是真核生物界中最高度保守的蛋白之一，最初作为一个DNA结合蛋白被发现。作为核蛋白，它的主要功能是参与调节核小体结构稳定性从而调控转录因子与目的基因序列的结合并影响其转录活性。上世纪90年代末期，HMGB1被重新发现是一种晚期炎性介质参与休克性脓毒血症的病理过程。进一步研究发现HMGB1是一种预警素启动固有免疫引发宿主免疫防御反应。目前认为有两种机制促使HMGB1从细胞内释放到细胞外间质：一种是细胞受损或凋亡后被动释放HMGB1诱发炎性防御反应，表明机体固有免疫系统能识别细胞损伤信号启动损伤修复机制；另一种是免疫细胞受刺激活化后主动性分泌。基于胞内 HMGB1属核蛋白并不具备炎性刺激功能，且HMGB1基因敲除小鼠表型是丢失其作为核蛋白的功能，体现在类固醇激素信号丧失导致新生鼠于出生后48小时内死亡。因此，HMGB1阻断抗体较HMGB1基因敲除小鼠或转基因小鼠更宜研究其胞外功能。

我们经大量筛选获得了一株能分泌HMGB1阻断性单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过BALB/c小鼠诱生腹水法制备单克隆抗体并经Protein A亲和层析法进行纯化，纯化后的抗体纯度较高，体外实验证实该中和抗体 (20μg/ml) 几乎能完全阻断 rHMGB1（15μg/ml）诱导的DC成熟（图 1）和RAW264.7分泌TNF-α（图 2）。在以Balb/C小鼠为受者B6小鼠为供者的同种异体皮肤移植模型（于术前二天腹腔注射中和抗体或对照IgG，600μg/只，二天一次，持续至术后第10天）进一步证实该单抗不仅延迟排斥反应的发生，而且显著提高移植物的成活率（图 3），揭示其超强阻断体内HMGB1信号转导的能力。

图1