Nanolipo RNAi转染试剂使用说明

（如 siRNA、miRNA mimics，不建议转染质粒）的转染实验。该转染试剂转染时无需进行培养基更换操作，尤其适合

原代巨噬/DC/成纤维细胞/脂肪干细胞等细胞的体外转染以及体内靶向实验。

表 1 试剂盒成分组成

运输保存

室温运输，4℃保存，可以稳定保存一年。

使用方法

使用前须知

1）       用试剂盒中自带的RNAi Buffer溶剂溶解siRNA , 配置50 μM储存液备用

2）       需要自备无菌的PBS

3）       需要在细胞操作台中提前准备涡旋振荡仪

4）       Nanolipo RNAi Reagent试剂管中，不能混入水溶液

转染方法

以在24孔中使用Nanolipo RNAi Reagent 转染终浓度为100 nM的siRNA为例，其他规格孔板转染请参考表2。

1.接种细胞 

接种适量细胞至24孔板培养孔中，当细胞正常生长并且汇合度达到60~80%，即可进行转染。

2.转染与检测

对于每个转染样品（一个24孔），请按以下步骤准备：

a.       取10μl PBS缓冲溶液置于1.5ml EP管中，加入1μl上述siRNA溶液，涡旋混匀。涡旋的同时，缓慢加入0.5μl Nanolipo RNAi Reagent ，加完后，再涡旋5秒混匀。（必须在涡旋的时候，加入 Nanolipo RNAi Reagent）

b.       将a步骤配置好的最终溶液加至500μl完全培养基。混匀后，弃去原孔内培养基，加入该培养基。。

c.       将培养板置于 37℃的 CO2 培养箱中培养 24~96h（培养时间与实验目的相关）。

d.       孵育24小时，即可RT-PCR检测相应mRNA。孵育48小时，即可Western检测相应蛋白表达。

表 2 使用Nanolipo RNAi Reagent 转染 siRNA 用量参考

v1: 细胞培养基; v2: PBS; v3: 100μM siRNA; v4: Nanolipo RNAi Reagent