酶联免疫吸附(ELISA)试验

实验原理：

ELISA是将抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合而发展起来的一种定性和定量检测方法。固定在载体表面的抗原或者抗体不会失活，仍然保留其免疫反应性。酶标记的抗体或者抗原既具有免疫学活性，还具有酶的催化活性。

实验步骤：

1.首先将抗原或者抗体固定在固相载体上。

2.加入检测对象，让待测物质与固相化物质结合，形成固相化的“抗原—抗体”复合物。

3.加入酶标记的抗体或者抗原，与固相化的复合物结合，形成酶标复合物。

4.加入底物溶液，发生酶催化底物显色反应，根据颜色深浅进行定性或定量分析。

结果判读：

①定性测定

定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。

②定量测定

在定量测定中，每批测试均需用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。