天狼猩红

天狼猩红染色可直接观察分析胶原纤维化程度，主要应用于各种组织病变时对胶原纤维异常或纤维增生的研究中。

实验原理：天狼猩红(Picrosirius Red )染色可用于区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原，由于天狼猩红是一种强酸性阴离子染料，可与呈碱性的胶原反应，使胶原纤维在偏振光照射时，产生明显的双折光现象。不同的胶原纤维具有不同的旋光性，在偏振光显微镜下呈现相异的颜色，借以区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原，Ⅰ型纤维：紧密排列， 显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维；Ⅱ型纤维：显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布；Ⅲ型纤维：显示弱的双折光，呈绿色的细纤维；Ⅳ型纤维：显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。

技术流程：

1.10X天狼猩红溶液配置：

  天狼猩红1g 

  饱和苦味酸 10ml

  将天狼猩红染料溶解于饱和苦味酸中，混合均匀。

2.将10X天狼猩红溶液用饱和苦味酸稀释为1X天狼星红溶液。

3.脱蜡制水：将石蜡切片依次放入二甲苯Ⅰ（15min）、二甲苯Ⅱ（15min）、二甲苯Ⅲ（15min）、无水乙醇Ⅰ（10min）、无水乙醇Ⅱ（10min）、95%无水乙醇Ⅰ（10min）、95%无水乙醇Ⅱ（10min）、80%无水乙醇（10min），流水冲洗10min，吸干多余水分

4.天狼猩红染色：1X天狼猩红溶液滴于样本表面，室温染色1.5-2h，迅速过水洗去多余染料。

5.苏木素染色：苏木素溶液染色5min，水洗洗去多余染料，1%盐酸酒精分化1s，流水反蓝8min。

6.无水乙醇浸泡5min，取出，风干后封片。